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噻唑蓝标准品用途及试验步骤介绍
更新时间:2020-09-18   点击次数:724次
 噻唑蓝标准品常用于基于MTT检测方法的细胞活力、细胞增殖或细胞毒性检测。因为MTT具有正电荷,它可以穿过细胞膜并被线粒体还原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有机溶剂。  
噻唑蓝标准品用途:  
1.药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;  
2.细胞增殖及细胞活性测定。检测原理如上所述,根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。  
实验步骤:  
1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.  
2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。  
3:呈色:培养3-5天后,每孔加噻唑蓝标准品溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4h  
终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ulDMSO,振荡10min,使结晶物充分融解。  
4:比色:选择490nm波长,在酶标仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

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