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噻唑蓝标准品正确的实验步骤分析
更新时间:2022-12-25   点击次数:368次
  噻唑蓝标准品是一种黄色或橙黄色粉末,熔点:195℃(分解)。微溶于甲醇中,但难溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能将其溶解。溶于DMSO中。常配制成5mg/ml的储备液。
  
  噻唑蓝标准品的实验步骤:
  
  1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
  
  2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
  
  3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
  
  4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
  
  5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
  
  6.依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
  
  7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
  
  8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长,互相争夺营养和空间,而产生抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。
  
  

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